Lè yon eksperyans echwe, èske ou janm lonje dwèt sou reyaktif chè oswa enstriman konplèks? Men pafwa, vrè "koupab la" ka kache tou dousman nan kwen - sa ki sanble òdinè boutèy reyaktif tanpon. Malgre ke li se discrète, li se liy lavi a pou kenbe presizyon nan eksperyans la. Jodi a, nou pral dekouvri sekrè "gadyen envizib" sa a.
Ⅰ. Buffer: kisa li ye? Poukisa li endispansab nan laboratwa a?
Senpleman mete, yon tanpon se yon sistèm solisyon espesyal ki ka reziste efè yon ti kantite asid te ajoute, alkali oswa dilution epi kenbe yon valè pH relativman ki estab nan solisyon an. Anjeneral li konpoze de yon pè "patnè" - yon asid fèb ak baz konjige li yo (oswa yon baz fèb ak asid konjige li yo), tankou asid acetic / acetate sodyòm (HAc/Ac-), sodyòm diidwojèn fosfat / disodyòm idwojèn fosfat (NaH₂PO₄, Na₄), elatriye nan laboratwa ki komen.
Kapasite debaz: Estabilize pH ak reziste chanjman!
Lè yon ti kantite sibstans asid oswa alkalin yo aksidantèlman prezante nan eksperyans la, "patnè" nan tanpon an pral reyaji byen vit, tankou yon "gadyen idwojèn ion" efikas, absòbe oswa lage li, kidonk evite fluctuations radikal nan valè pH solisyon an. Kapasite sa a esansyèl pou anpil reyaksyon byochimik ki depann sou yon anviwònman pH espesifik.
Ⅱ. Etap laboratwa: yon protagonist endispansab ak wòl sipò
1. "Sistèm sipò lavi" nan eksperyans byochimik:
Rechèch aktivite anzim:Pifò anzim gen aktivite optimal sèlman nan yon seri pH etwat. Tanpon (tankou Tris-HCl, PBS) bay yon "bann travay" ki estab pou reyaksyon anzim pou asire rezilta serye.
Pwoteyin pou pirifye ak analiz:Soti nan liz selil, separasyon kwomatografik (echanj ion, kromatografi afinite) nan elektwoforèz (tankou SDS{0}}PAGE), kristalizasyon pwoteyin ak depo, chak etap mande pou yon tanpon ak yon pH espesifik pou kenbe estrikti, chaj ak solubilite nan pwoteyin nan epi anpeche denaturasyon oswa presipitasyon.
Manipilasyon asid nikleik:Reyaksyon PCR, ekstraksyon ADN / RNA, dijesyon anzim, ligasyon, ibridizasyon ak lòt pwosesis yo trè sansib a pH. Tanpon yo itilize souvan tankou TE (Tris-EDTA) ka estabilize estrikti asid nikleyik epi pwoteje yo kont degradasyon nukleaz.
2. "Lullaby" nan kilti selil:Mwayen kilti selil (tankou DMEM, RPMI) tèt li se yon sistèm tanpon konplèks (souvan konte sou bikabonat sodyòm / sistèm gaz kabòn). Ajoute tanpon adisyonèl (tankou HEPES) ka bay selil yo yon anviwònman pH ki pi estab, espesyalman lè yo chanje likid, obsève oswa lè konsantrasyon gaz kabonik ka varye, pou asire kwasans selil an sante.
3. "Fòs estabilize" nan chimi analyse:
Separasyon kwomatografik:Nan segondè pèfòmans likid chromatografi (HPLC) ak ion chromatografi (IC), pH la nan faz mobil la se paramèt kontwòl kle pou efè a separasyon, ak tanpon (tankou fosfat ak acetate) asire repwodiksyon pwosesis separasyon an.
Analiz titrasyon:Gen kèk reyaksyon titrasyon ki bezwen fèt nan yon pH konstan oswa endike pwen final la lè yo rive nan yon pH espesifik, ak tanpon an jwe yon wòl estabilize.
Preparasyon solisyon estanda:Valè pH anpil solisyon estanda bezwen kontwole jisteman, ak tanpon yo se baz la.
Ⅲ. Seleksyon ak itilizasyon: anpil konesans
Chwazi bon sistèm tanpon:
Valè pKa se kle:Ranje tanpon efikas nan yon tanpon anjeneral nan seri pKa ± 1 valè li yo. Asire w ke w chwazi yon tanpon ki gen yon valè pKa ki toupre pH k ap travay ou bezwen an! Pou egzanp, fosfat (pKa ~ 7.2) souvan itilize nan ranje pH net, ak Tris (pKa ~ 8.1) souvan itilize nan alkalin.
Konpatibilite:Konsidere si eleman tanpon yo entèfere ak reyaksyon eksperimantal ou a (egzanp fosfat ka entèfere ak kèk etid fosforilasyon, ak borat ka reyaji ak sik).
Fòs iyonik ak tanperati:Fòs iyonik afekte aktivite anzim, solubilite, elatriye; chanjman tanperati yo ka afekte anpil valè pKa tanpon tankou Tris (Tris gen yon gwo koyefisyan tanperati pKa apeprè -0.031 / degre).
Ⅳ. Lis tanpon komen
1. PBS seri tanpon
PBS tanpon 1 × (pH7.4), PBS tanpon 10 × (pH7.4), poud fosfat PBS (san iyon kalsyòm ak mayezyòm): lave selil nan eksperyans kilti selil (tankou anvan chanje mwayen kilti a); dilye antikò ak lave plak ELISA nan eksperyans iminoloji; kenbe presyon osmotik ak estabilite pH nan eksperyans pwoteyin / asid nikleyik, elatriye.
Tanpon DPBS (san kalsyòm ak mayezyòm), poud fosfat DPBS (san iyon kalsyòm ak mayezyòm): sikometri koule nan eksperyans selil, lave apre dijesyon selil (pou evite kalsyòm ak mayezyòm entèfere ak aktivite anzim); dilye anzim oswa fè eksperyans iyon -sansib nan byoloji molekilè (tankou sèten reyaksyon PCR), elatriye.
Tanpon PBST (1 ×), tanpon PBST (10 ×): yo itilize pou bloke ak lave etap nan Western Blot oswa imunohistochimi, diminye obligatwa ki pa espesifik, elatriye.
2. seri tanpon TBS
Tanpon TBS (1×), tanpon TBS (10×): ranplase tanpon PBS nan eksperyans iminoloji (pou evite entèferans fosfat ak sèten antikò obligatwa); estabilize anviwònman pH alkalin nan eksperyans pwoteyin, elatriye.
3. seri tanpon HBSS
Tanpon HBSS (kalsyòm ak mayezyòm gratis, fenol wouj gratis) / Tanpon Hank (kalsyòm ak mayezyòm gratis): separasyon selil ak lave santrifujeur nan eksperyans selil (tankou sikometri koule); antretyen selil kout -tèm (tankou imaj selil vivan), elatriye HBSS tanpon (san kalsyòm ak mayezyòm, san fenol wouj): kenbe aktivite metabolik selilè nan kilti selil (kalsyòm ak mayezyòm patisipe nan transdiksyon siyal); eksperyans migrasyon selil/envazyon.
4. TE tanpon seri
Tanpon TE (1×), tanpon TE (10×): fonn epi estoke ADN/RNA (Tris kenbe pH, EDTA chelate iyon metal pou anpeche aktivite nuclease); dilye ADN pou PCR, sekans ak lòt eksperyans.
5. Elektwoforèz tanpon seri
TAE tanpon (1 ×): konvansyonèl ADN agarose jèl elektwoforèz (rezolisyon ki ba, apwopriye pou fragman ADN gwo). Tanpon TBE (1×), tanpon TBE (10×): segondè -elektwoforèz ADN/ARN rezolisyon (tankou ti fragman oswa elektwoforèz jèl poliakrilamid); elektwoforèz alontèm -(kapasite tanpon pi bon pase TAE).
6. Western Blot Eksperyans Tanpon Seri
Tanpon Western Blot Transfè (10 ×): Tanpon yo itilize pou transfere pwoteyin soti nan jèl nan manbràn (tankou manbràn PVDF), ki gen Tris, glisin ak metanol.
Tanpon Tris-HCl (1mol/L, pH6.8): Preparasyon jèl konsantre SDS-PAGE, elatriye.
Tanpon Tris-HCl (1.5mol/L, pH8.8): Preparasyon jèl separasyon SDS-PAGE, elatriye.
7. Estanda pH tanpon seri
pH =4.00/6.86/9.18 tanpon (prepare 250mL): solisyon estanda pou kalibre pH mèt (egzanp pH6.86 se estanda net, pH4.00 ak 9.18 se estanda asid ak alkalin).
Reyaktif tanpon yo pa vle di yon wòl sipò debaz nan laboratwa a. Valè debaz yo se nan bay yon anviwònman pwoton presi ak ki estab, ki se poto a pou kenbe ekilib tèrmodinamik la ak pousantaj sinetik nan pifò reyaksyon byochimik. Soti nan règleman mikwo-anviwònman nan sit aktif anzim yo, nan garanti estabilite konformasyon biomacromolecules, nan antretyen nan gradyan iyon transmembrane, kapasite tanpon pH nan sistèm tanpon an se yon avantou endispansab pou repetibilite ak fyab nan done eksperimantal. Beekman pral akonpaye w nan vwayaj rechèch syantifik ou a.
Hunan BKMAM kenbe co, Ltd
Sit entènèt: www.bkmbio.com
Imèl:info@bkmbio.com